فهرست مطالب کتاب فلوسایتومتری
|
صفحه |
عنوان فصل 1 ) اساس فلوسايتومتري |
| 13 |
تاريخچة تكامل فلوسايتومتري |
| 14 |
اصول اساسي فلوسايتومتري |
| 18 |
آناليز فلورسانس |
| 18 |
پراكندگي نور (light scatter) و رديابي فلورسانس |
| 18 |
فيلترها |
| 22 |
مجموعة فيلترها |
| 23 |
جمع‌آوري سيگنال‌ها (acquisition) |
| 24 |
تقويت سيگنال‌ها |
| 24 |
نمودار هيستوگرام |
| 25 |
ضريب تغييرات (CV) |
| 27 |
مشكل هم‌پوشاني نوري و نحوة جبران آن |
| 27 |
حفاظت از ليزر |
| 29 |
جدا سازي سلول‌ها (cell sorting) |
| 30 |
فلوسايتومترهاي تجارتي |
|
صفحه |
عنوان فصل 2 ) تهية سلول براي فلوسايتومتري |
|
31 |
مقدمه |
|
33 |
فاكتورهاي موثر در انتخاب روش تهية سلول |
|
35 |
فاكتورهاي موثر در تهية سوسپانسيون سلولي |
|
35 |
آماده كردن نمونه‌هاي خون و مغز استخوان |
|
37 |
روند كار با خون كامل زنده |
|
40 |
روند كار با خون كامل زنده براي رنگ‌آميزي مستقيم و رنگ‌آميزي هسته |
|
41 |
روش‌هاي جداسازي لكوسيت‌ها |
|
43 |
ته نشين‌سازي اريتروسيت‌ها با استفاده از پليمرهاي دكستران |
|
43 |
روش كار براي جداسازي لكوسيت‌هاي خون با استفاده از دكستران |
|
43 |
جداسازي لكوسيت‌ها با استفاده از شيب غلظت |
|
46 |
روش جداسازي سلولهاي تك هسته‌اي خون با استفاده از فيكول |
|
46 |
جداسازي توأم سلولهاي نوتروفيل و تك‌هسته‌اي با استفاده از فيكول |
|
48 |
انتخاب و جداسازي سلول با استفاده از افينيتي آنتي‌بادي |
|
49 |
ليز كردن اريتروسيت‌ها |
|
50 |
ليز اريتروسيت‌ها با آب مقطر |
|
50 |
ليز كردن اريتروسيت‌ها با محلول كلرور آمونيوم |
|
52 |
ليز كردن اريتروسيت‌ها با استفاده از ساپونين |
|
52 |
روش كار با خون كامل ليز شده |
|
54 |
رنگ‌آميزي ايمني مستقيم با استفاده از خون كامل ليز شده |
|
55 |
تهيه سوسپانسيون سلولي از بافت‌هاي جامد و كشت‌هاي سلولي |
|
56 |
تهيه سوسپانسيون لنفوسيت‌هاي كوچك از بافت‌هاي لنفاوي |
|
56 |
تهيه سوسپانسيون سلولي از بافت‌هاي جامد |
|
57 |
تهيه سوسپانسيون سلولي از سلولهاي متصل شونده به بستر |
|
57 |
ثابت كننده‌هاي مرسوم و اثرات آنها |
|
59 |
نفوذپذير كردن و رديابي محتويات داخل سلولي |
|
62 |
رديابي آنتي‌ژن‌هاي سطحي و داخل سلولي لكوسيت‌ها |
|
62 |
نشانداركردن با آنتي‌بادي |
|
62 |
آنتي‌بادي‌ها |
|
64 |
واكنش‌هاي بين آنتي‌ژن و آنتي‌بادي |
|
65 |
تيتراسيون آنتي‌بادي |
|
66 |
حساسيت رديابي و اندازه‌گيري آنتي‌ژن‌هاي سطح سلولي |
|
68 |
رنگ‌آميزي ايمني مستقيم و غيرمستقيم |
|
70 |
رنگ‌آميزي غيرمستقيم سلولهاي زندة خون كامل |
|
71 |
تعيين شمارش مطلق سلول |
|
72 |
مقابله با خطرات احتمالي |
|
صفحه |
عنوان فصل 3) فلورسانس و فلوروكروم ها |
|
73 |
مقدمه |
|
75 |
اثرات متقابل ماده و نور |
|
78 |
جذب نور منجر به فلورسانس مي‌شود |
|
84 |
مكانيسم رنگ‌آميزي با رنگ‌هاي فلورسانس |
|
84 |
فلورسانس خودبخودي سلول |
|
85 |
انتقال انرژي در اثر رزونانس بين دو فلوروكروم |
|
87 |
انواع فلوروكروم‌ها |
|
87 |
فلوئورسئين و ساير فلوروكروم‌هاي حاوي فلورسانس سبز رنگ |
|
89 |
Phycobiliproteins و PerCP |
|
92 |
رنگ‌هاي تركيبي (Tandem Dyes) |
|
94 |
Quantum Dots |
|
96 |
كونژوگه كردن فلوروكروم‌ها به ماكرومولكول‌ها |
|
98 |
استفاده از فلوروكروم‌هاي كونژوگه با پروتئين A يا G و آويدين يا استرپتاويدين |
|
99 |
فلوروكروم‌ها براي نشانداركردن اسيدهاي نوكلئيك |
|
105 |
كاوشگرهاي فلورسانس براي تشخيص زنده بودن و مرگ سلول‌ها |
|
105 |
بررسي سالم بودن غشاء سلول |
|
107 |
پتانسيل غشائي |
|
110 |
آپوپتوز |
|
112 |
كاوشگرهاي فلورسنت براي تعيين غلظت يون‌هاي داخل سلولي |
|
113 |
يون‌هاي كلسيم |
|
114 |
اندازه‌گيري pH |
|
115 |
پروب‌هاي فلورسنت براي ارزيابي فاگوسيتوز و متابوليسم اكسيداتيو |
|
115 |
فاگوسيتوز |
|
116 |
متابوليسم اكسيداتيو |
|
118 |
سوبستراهاي فلوروكروم‌دار براي اندازه‌گيري فعاليت آنزيم‌ها |
|
119 |
رنگ‌هاي فلورسنت براي اندازه‌گيري پروتئين توتال |
|
119 |
انتخاب فلوروكروم‌ها براي استفاده در دستگاه‌هاي مجهز به ليزر تك رنگ 488 |
|
124 |
انتخاب فلوروكروم‌ها براي استفاده در دستگاه‌هايي كه بيش از يك منبع ليزر دارند |
| صفحه |
عنوان فصل 4 ) كنترل كيفي در فلوسايتومتري |
| 129 |
مقدمه |
| 130 |
كنترل كيفي داخلي |
| 130 |
كنترل كيفي دستگاه |
| 131 |
دانه‌هاي نوع صفر |
| 131 |
دانه‌هاي استاندارد |
| 131 |
استانداردهاي مرجع |
| 132 |
استانداردهاي كاليبراسيون |
| 134 |
اهداف و انتظارات كنترل كيفي |
| 134 |
آماده‌سازي نمونه |
| 137 |
جمع آوري اطلاعات |
| 137 |
آناليز اطلاعات |
| 141 |
ارزيابي كيفي خارجي |
| 142 |
انتخاب معرف‌ها |
| 142 |
انتخاب معرف‌ها (كلون‌ها) |
| 143 |
انتخاب مواد (كونژوگه‌ها) |
| 144 |
تعريف مقادير ارزش‌هاي مثبت |
| 145 |
شمارش تعداد مطلق |
| 146 |
نتيجه‌گيري |
|
صفحه |
عنوان فصل 5 ) آزمايش، جمع‌آوري و آناليز داده‌ها |
| 147 |
مقدمه |
| 148 |
چه تعداد سلول بايد ارزيابي شود؟ |
| 150 |
استفاده از "آستانه گذاري" براي افزايش سرعت جمع‌آوري اطلاعات |
| 151 |
انتخاب فلوروكروم |
| 153 |
انتخاب كلون آنتي‌بادي مونوكلونال |
| 153 |
انتخاب كنترل منفي |
| 154 |
آناليز بروز CD4 بر روي گرانولوسيت‌ها |
| 155 |
آناليز سلولهاي نكروتيك و آپوپتوتيك در كشت با استفاده از يديد پروپيديوم |
| 157 |
اندازه‌گيري شدت فلورسانس |
|
صفحه |
عنوان فصل 6 ) جستجوي آپوپتوز با فلوسايتومتري |
| 163 |
مقدمه |
| 164 |
مسيرهاي آپوپتوز و نقش ميتوكندري |
| 166 |
آپوپتوز و نكروز |
| 167 |
ويابيليتي و نكروز |
| 168 |
بررسي آپوپتوز با استفاده از رنگ 7-ADD |
| 169 |
بررسي آپوپتوز و نكروز با استفاده از PI و Hoechst 33342 |
| 169 |
بررسي تغييرات غشائي با استفاده از YO-PRO-1 |
| 171 |
آپوپتوز |
| 173 |
رديابي آپوپتوز با استفاده از PI |
| 174 |
رديابي آپوپتوز با استفاده از روش TUNEL |
| 175 |
رديابي PS بعنوان مارکر آپوپتوز با استفاده از آنکسین V |
| 175 |
رديابي تغییرات در غلظت Δψm با استفاده از رنگ‌های غیرقابل‌فیکس |
| 177 |
رديابي تغییرات در Dym با استفاده از CMXRos (قابل فیکس) |
| 177 |
رديابي تغییرات غلظت Δψm با استفاده از TMRE |
| 178 |
رديابي کاسپاز فعال شده با آنتی‌بادی‌های ضد کاسپاز |
| 178 |
مزیت‌ها و معايب روش‌ها |
| 179 |
مشکلات موجود در آزمایش تعیین مقدار DNA |
| 181 |
مشکلات همراه با روش‌هاي PS و TUNEL |
| 182 |
مشکلات همراه با شناسایی Δψm |
| 182 |
مشكلات ناشي از روش‌ها |
|
صفحه |
عنوان فصل 7 ) آناليز DNA با فلوسايتومتري |
| 183 |
مقدمه |
| 184 |
چرخه سلولي |
| 185 |
پروتکل برای آنالیز فاز S در سلول‌ها با بکارگیری بروموداکسی یوریدین |
| 186 |
محل‌های بازرسی |
| 189 |
رديابي سیکلین‌ها و دیگر پروتئین‌های هسته‌ای |
| 191 |
انحرافات عددی کروموزوم |
| 193 |
رنگ‌های مورد استفاده برای تشخیص مقدار DNA |
| 196 |
پروتکل برای توزیع چرخة سلولی بوسیله مقدار DNA |
| 196 |
رنگ آميزي DNA سلول هاي زنده با استفاده از Hoechst 33342 |
| 196 |
پردازش پالس |
| 198 |
فيكس‌كردن و نفوذپذیر كردن سلول‌ها برای آنالیز |
| 200 |
مناسب سازي پروتکل‌ها |
|
صفحه |
عنوان فصل 8 ) بررسي سلولهاي انساني با فلوسايتومتري |
| 201 |
شناسايي سلولهاي خوني انسان |
| 203 |
آناليز سلولهاي كمياب |
| 203 |
آمارة موارد نادر: چه تعداد سلول بايد ارزيابي شوند؟ |
| 205 |
ملاحظات ديگر براي جمعيت‌هاي كوچك |
| 206 |
حذف سلول هاي نشاندار شدة غير اختصاصي با استفاده از روش Dump Channel |
| 207 |
حذف سلول هاي مرده، اريتروسيت ها و Debris |
| 209 |
اختلال در جريان نمونه |
| 209 |
تكثير سلول |
| 209 |
رنگ‌هاي مورد استفاده براي ارزيابي تكثير سلولي |
| 210 |
استفاده از CFDA,SE |
| 211 |
نشاندار كردن سلول ها با استفاده از CFDA,SE |
| 212 |
پروتكل براي نشاندار كردن سلول ها با CFDA,SE |
| 212 |
كنترل‌هاي لازم براي پروليفراسيون و نشانداركردن آنتي‌ژن |
| 213 |
آناليز سلول هاي نشاندار شده با CFDA,SE |
| 215 |
محاسبه تكثير سلولي و نمايش تصويري داده‌ها |
| 217 |
اندازه‌گيري تكثير زير گروه سلولي در كشت‌هاي سلولي مختلط |
| 218 |
نشانداركردن سايتوكاين‌ها و كموكاين‌هاي داخل سلولي |
| 220 |
مهار سيستم ترانسپورت پروتئين |
| 221 |
Monensin و Brefeldin A محاسن و معايب |
| 223 |
فعال‌سازی سلول، جمعیت کنترل و زمان برداشت سلول‌ها |
| 224 |
روش نشانداركردن سايتوكاين‌هاي داخل سلولي |
| 225 |
Brefeldin A |
| 225 |
بافر نفوذپذير كننده |
| 225 |
روش نشانداركردن |
| 228 |
اندازه‌گيري كمي توليد سايتوكاين‌ها |
|
|
|
| صفحه |
عنوان فصل 9 ) بررسي غلظت و جابجايي كلسيم |
| 229 |
مقدمه |
| 230 |
روش ردیابی حرکت کلسیم در داخل سلول |
| 230 |
مرحلة شستشوي بعد از رنگ‌آميزي |
| 231 |
جمع‌آوري داده‌ها |
| 232 |
اندازه گيري جريان كلسيم سيتوپلاسمي با رنگ Indo-1 |
| 232 |
اندازه گيري جريان كلسيم به ميتوكندري با استفاده از Rhod-2 |
| 234 |
تغییرات در کلسیم داخل سلولی بعد از فعال‌شدن گیرنده |
| 235 |
روش آزمايش جريان كلسيم با بكار گيري Fluo-3 |
| صفحه |
عنوان فصل 10 ) بررسي عملكردي بيشتر |
| 239 |
مقدمه |
| 240 |
بیان آنتی‌ژن‌های عملکردی و گیرنده‌های سطح سلولی |
| 241 |
روش استفاده از خون کامل برای آنالیز لوکوسیت‌ها |
| 241 |
پيام‌رساني گیرنده |
| 241 |
مسیرهای پيام رساني |
| 243 |
اندازه‌گيري وقايع پيام‌رساني توسط فسفوريلاسيون پروتئين |
| 245 |
اندازه‌گيري وقايع پيام‌رساني با فسفوريلاسيون پروتئين (پروتكل) |
| 246 |
پرايم نمودن و فعال سازي |
| 247 |
پاسخ‌هاي طولاني مدت به سيتوكاين‌ها و يا هورمون‌ها |
| 249 |
تغییرات شکلی |
| 250 |
اتصال جاذب‌هاي شیمیایی و پاسخ سریع به کموتاکسین/فعال کننده |
| 250 |
آزمایش مهاجرت |
| 252 |
پتانسيل غشايي و تغييرات در نفوذپذيري يوني |
| 253 |
فاگوسيتوز، اندوسيتوز و انفجار اكسيداتيو |
| 256 |
روش آزمایش |
| 256 |
کشت باکتری |
| 256 |
اپسونیزاسیون باکتری |
| 256 |
نشاندار کردن باکتری با PI |
| 256 |
تهيه PMA مصرفي |
| 257 |
آماده سازي DCFH-DA |
| 257 |
روش تشکیل محصول اکسیداتیو |
| 257 |
روش براي آزمايش برداشت باكتري توسط سلول |
| 258 |
انجام فلوسایتومتری |
| 258 |
آزمایش‌های جايگزين |
| 260 |
آزادسازی نیتریک اکساید |
| 261 |
تکنیک‌های چند پارامتری برای ارزیابی عملکرد و فنوتیپ |
| 261 |
مولکول‌های چسبنده موثر در برهمکنش‌های سلول به سلول |
| 263 |
آنالیز برهمکنش بين سلول‌ها |
| 263 |
برهمکنش بين پلاکت‌ها |
| 264 |
آنالیز فعال‌شدن پلاکت‌ها با فلوسایتومتری |
| 264 |
تغییرات سطحي غشاء |
| 264 |
وقايع داخل سلولي |
| 265 |
روش‌هایی برای آنالیز مولكول‌هاي چسبندگي و فعال شدن پلاکت‌ها |
| 265 |
متغیرهای قبل از آنالیز: ضد انعقادها |
| 265 |
خونگيري وریدی برای نمونه‌های فلوسایتومتری |
| 269 |
آنالیز آنتی‌ژن‌های سطحي فعال شدن پلاکت‌ها |
| 269 |
آناليز سلكتين P در خون كامل |
| 270 |
آنالیز ميكروپارتيكل‌هاي مشتق از پلاکت |
| 271 |
تعیین کمی و تعیین خصوصیت میکروپارتیکل‌های پلاکت |
| 272 |
برهمكنش بين لوكوسيت‌ها و پلاكت‌ها |
| 273 |
اندازه‌گيري تجمعات لوكوسيت-پلاكت در خون |
| 273 |
برهمكنش بين لوكوسيت‌ها |
| 273 |
اندازه‌گیری برهمکنش لوکوسیت-لوکوسیت |
| 275 |
برهمکنش‌های سلول اندوتلیال-لوکوسیت |
| 276 |
اندازه‌گیری برهمکنش بين سلولهاي اندوتلیال و لوکوسیت |
|
صفحه |
عنوان فصل 11 جداسازي سلول‌ها با فلوسايتومتر |
| 277 |
مقدمه |
| 278 |
كاربردها |
| 279 |
خصوصيات جداساز ذره |
| 279 |
جداسازي الكترواستاتيك |
| 284 |
جداسازي مكانيكي و ساير اشكال جداسازي |
| 285 |
كارهاي عملي دسته‌بندي سلول |
| 285 |
آماده‌سازي نمونه |
| 285 |
آماده‌سازي از سوسپانسيون‌هاي سلولي |
| 286 |
آماده‌سازي سلولهاي چسبنده |
| 286 |
آماده‌سازي بافت جامد |
| 287 |
Setup كردن جداساز جرياني |
| 288 |
جداسازي |
| 294 |
نكته‌ها و راه حل‌ها |
| 297 |
ملاحظات ايمني و سلامت |
| 299 |
رفرانس‌هاي همه بخش ها |